Diabetologia：激活但功能受损的失忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失口内自身特异性到消失1改型肝炎流行病学副作用的十分困难率在孩童时期就有很好的描绘出，多个口内自身特异性非典型的孩童里面有70%在血清类比后10年内身患肝炎，而随访15年的孩童这一比例减小到84%。远比，占总流行病学1改型肝炎一半以上的改型1改型肝炎的发作机制还无法获取充分的研究课题。

越来越多的人开始运用于分期系统来假定1改型肝炎的十分困难：幼体在消失多种口内自身特异性时进入第1先决条件，消失血糖诱发时进入第2先决条件，消失副作用时进入第3先决条件。一些多发口内自身特异性非典型的幼体，在1期和2期，十分困难较慢，并发展为发作的1改型肝炎。我们早先描绘出了四第一组在首次监测到多种口内自身特异性样品后至少10年无肝炎的极快十分困难者，这第一组病症人数少，但特征十分明确。随后，我们发现口内自身蛋白质特异性CD8+T细胞核质子化在十分困难平稳的病症里面大体不存在，但在近期发作和由来已久的肝炎病症里面很容易监测到。这似乎表明，与十分困难病症相比，这些病症自身免疫质子化的适度增强。

晚期研究课题表明，尽管适度性T细胞核(Treg)存量也就是说，但肝炎病症存在一些功能有缺陷，其里面包括对IL-2的质子化能力提高。此外，肝炎病症里面的振荡CD4+T细胞核似乎对适度增添抵抗性，表现为振荡T细胞核的依赖性减弱，自然消除的Treg和体外消除的游离Treg，以及蛋白质经历的CD4+T细胞核里面IL-2质子化减弱。本研究课题的目的是描绘出了CD4+适度性T细胞核(Treg)在一小群极平稳十分困难者里面的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法有：BOX研究课题是一项以老年人为基础的纵向研究课题，在21岁以下确诊的病症直系亲属里面检查1改型肝炎的危险状况。我们早先描绘出了长期平稳十分困难者的特征，他们持续保持多重口内自身特异性非典型超过10年，但无法消失肝炎的流行病学副作用，慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名在此之后持续保持无肝炎并想要提供大量血液样品的平稳十分困难者纳入T和B细胞核功能统计分析。在现先决条件的研究课题里面，8名慢十分困难者(SP第一组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的口内自身特异性非典型。所有的参与者都持续保持稳定1改型肝炎十分困难的1期，尽管一些人随后得不到了口内自身特异性对某些蛋白质的非典型质子化，然而，一名病症已经持续保持稳定2期至少6年，但无法消失流行病学副作用，一名病症被诊断为肝炎，该实验者72岁，在采自实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析里面对该供体顺利进行了单独审计。复合外周血单个核细胞核(PBMCs)，换用多参数流式细胞核忍术和T细胞核依赖性试验中审计供体里面Treg的振幅、基因改型和功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、也就是说和转回)顺利进行无监督聚类统计分析，审计Treg基因改型。

结果：与肥胖供体相比，来自慢十分困难体的无意识CD4+T细胞核的监督聚类标示出，激来生的无意识CD4+ Treg振幅减小，与糖皮质激素游离的TNFR相关细胞内(GITR)表达减小有关。一名HbA1c升高的病症与十分困难平稳者和比如说的对照第一组相比，Treg可知有所不同。功能统计分析表明，与肥胖供体相比，来自平稳十分困难体的Treg激来生的CD4+振荡T细胞核依赖性明显受损。表现为对振荡CD4+T细胞核CD25和CD134表达的依赖性减小。

示意图1 深入的基因改型统计分析标示出，CD4+Treg亚改型在慢十分困难缓冲区里面减小。由FlowSOM分解的Treg楼内，聚集在来自所有供体的来生CD4+CD45RA -细胞核上。根据标示出物表达鉴别不止10个元簇:无意识T细胞核_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞核;HLA-DR + GITR +无意识T细胞核;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标示出分解的10个元簇的MST。每个节点值得一提的是一个一个大(100个一个大)，较大的元一个大(10个元一个大)在节点第一组一处绘图。每个节点里面的饼示意图回应单个标示出的表达级别。(b)每个元聚类的热示意图，以标示出整体标示出表达。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)分解示意图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较原子量为每个metacluster罐该线示意图(原子量> 0.05%)确切为HD和SP第一组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞核(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞核(l)。深蓝色左上方值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 运用于CITRUS的预测模改型证实，Treg振幅的减小是十分困难平稳的标记。分级门控(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP参与者和比如说的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞核上的关联性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团体的值得一提的是性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达顺利进行复合，模拟FlowSOM小团体。(b) HD(环纹)和SP(杂色)第一组以及供体SP 606(深蓝色)里面CD25+ cd127的振幅汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的罐该线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达强度着色，左下角突不止的簇被辨识为SP和HD缓冲区两者之间的不同。(j)罐该线示意图标示出了在SP(杂色)和HD(灰点)第一组里面，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相较原子量(比例)。(k)直方示意图标示出每个簇的基因改型(粉色)和Treg标示出相较表达与剧中表达(粉色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。剧中与所有其他簇里面标示出的表达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与肥胖献血者相比，十分困难平稳者无意识treg的GITR减小。每个无意识CD4+T细胞核元簇(无意识T细胞核_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞核;HLA-DR + GITR +无意识T细胞核;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个表达标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的表达热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(粉色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表达串联，标示出直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有供体包括，p< 0.05(粉色)供体SP 606和比如说的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表达，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉色)和SP 606(深蓝色)串联，标示出直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自平稳十分困难的CD4+ treg细胞核控制振荡CD4+T细胞核的能力提高。SP第一组用粉色的该线和左上方回应，HD第一组用紫色的该线和左上方回应，深蓝色的该线/左上方回应供体sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标示出为CFSE, Treg按观察的比例溶液。用抗CD3 /28微珠转化细胞核，培养出来3过后顺利进行流式细胞核忍术监测。(a-d)与CD4+转发者相较应的treg培养出来(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培养出来。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE依赖性总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性总和。运用于非典型对照(激来生的响应细胞核则有treg)推算依赖性总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 振荡CD4+T细胞核对平稳十分困难的T细胞核转化的依赖性更引人注意。SP第一组用粉色的该线和左上方回应，HD第一组用紫色的该线和左上方回应，深蓝色的该线/左上方回应供体sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标示出，treg按观察的比例溶液。用抗CD3 /28微珠转化细胞核，培养出来3过后顺利进行流式细胞核忍术(CD25反染)和细胞核因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培养出来。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE依赖性百分率(b)。(c,d) CD25依赖性百分率(c)和CD134依赖性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来里面的表达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得不止的结论是，来自平稳十分困难子的转化无意识CD4+Treg在GITR表达里面获取了扩大和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1改型肝炎风险幼体里面的异质性的必要性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28