Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐延展

从第一次消失呼吸道自身免疫反其所到消失1改型癌症临床病征的成果率在学童末期就有很好的详细描述，多个呼吸道自身免疫反其所非典改型的学童；还有70%在血清转换后10年内中风癌症，而随访15年的学童这一人口比例增大到84%。比较之下，占临床1改型癌症一半以上的改型1改型癌症的中风机制还没有得到充分的研究工作。

愈来愈多的人开始常用分期的系统来定义1改型癌症的成果：个基底在消失多种呼吸道自身免疫反其所时重回第1阶段，消失血糖异常时重回第2阶段，消失病征时重回第3阶段。一些多发呼吸道自身免疫反其所非典改型的个基底，在1期和2期，成果较慢，并发展为中风的1改型癌症。我们在此之后详细描述了一一组在首次检测到多种呼吸道自身免疫反其所抽样后至非常少10年无癌症的近乎慢成果者，这一组病变人数非常少，但特征非常明确。随后，我们发现呼吸道自身蛋白质抗体CD8+T细胞会反其所在成果很慢的病变中都基本不发挥作用，但在近期中风和长期发挥作用的癌症病变中都很容易检测到。这意味著表明，与成果病变比较，这些病变自身免疫反其所的闭环增强。

早期研究工作表明，尽管闭环性T细胞会(Treg)数量正常，但癌症病变发挥作用一些机能缺陷，其中都仅限于对IL-2的反其所意志力减少。此外，癌症病变中都的效其所CD4+T细胞会意味著对闭环非常具抵抗性，展现出为效其所T细胞会的诱导增强，纯净造成了的Treg和基底外造成了的诱导Treg，以及蛋白质随之而来的CD4+T细胞会中都IL-2反其所增强。本研究工作的目的是详细描述了CD4+闭环性T细胞会(Treg)在这群人近乎很慢成果者中都的特征，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁以下确诊的病变家庭成员中都检查1改型癌症的凶险因素。我们在此之后详细描述了长期很慢成果者的特征，他们保持多重呼吸道自身免疫反其所非典改型多达10年，但没有消失癌症的临床病征，慢性或非开展性自身免疫。随后，10名继续保持无癌症并愿意提供大量肠道抽样的很慢成果者纳入T和B细胞会机能数据分析。在目前的研究工作中都，8名慢成果者(SP一组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的呼吸道自身免疫反其所非典改型。所有的与会者都始终保持1改型癌症成果的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身免疫反其所对某些蛋白质的非典改型反其所，然而，一名病变之前始终保持2期至非常少6年，但没有消失临床病征，一名病变被诊断为癌症，该受试者72岁，在捕获试验抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析中都对该诱导开展了单独评估。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会绝技和T细胞会诱导试验评估诱导中都Treg的基频、表现改型和机能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无都由聚类数据分析，评估Treg表现改型。

结果：与肥胖症诱导比较，来自慢成果基底的失忆CD4+T细胞会的都由聚类表明，应答的失忆CD4+ Treg基频增大，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)解读增大有关。一名HbA1c升高的病变与成果很慢者和反之亦然的对照一组比较，Treg谱有所多种不同。机能数据结果表明，与肥胖症诱导比较，来自很慢成果基底的Treg介导的CD4+效其所T细胞会诱导明显受损。展现出为对效其所CD4+T细胞会CD25和CD134解读的诱导增大。

绘出1 全面性的表现改型数据分析表明，CD4+Treg亚改型在慢成果缓冲区中都增大。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有诱导的来时CD4+CD45RA -细胞会上。根据标示物解读鉴定出10个元簇:失忆T细胞会_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞会;HLA-DR + GITR +失忆T细胞会;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)常用9个多种不同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个路由表代表一个协同(100个协同)，近乎大的元协同(10个元协同)在路由表一组一处上色。每个路由表中都的饼绘出透露单个标示的解读级别。(b)每个元聚类的热绘出，以表明整基底标示解读。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)生成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的较厚。(e-l)比较数量级为每个metacluster箱内中央线绘出(数量级> 0.05%)确定为HD和SP一组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞会(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞会(l)。浅蓝色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组下标秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 常用CITRUS的预测模改型表明，Treg基频的增大是成果很慢的标志。基准依赖改型(a - f)和玉米数据分析(g-k)比较SP与会者和反之亦然的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的代表性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR解读开展分离，演示FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)一组以及诱导SP 606(浅蓝色)中都CD25+ cd127的基频汇总绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖改型长子集的箱内中央线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD缓冲区相互间的多种不同。(j)箱内中央线绘出表明了在SP(虎纹)和HD(灰点)一组中都，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的比较数量级(人口比例)。(k)直方绘出表明每个簇的表现改型(粉红色)和Treg标示比较解读与氛围解读(浅蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。氛围与所有其他簇中都标示的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组下标秩检验

绘出3 与肥胖症献血者比较，成果很慢者失忆treg的GITR增大。每个失忆CD4+T细胞会元簇(失忆T细胞会_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞会;HLA-DR + GITR +失忆T细胞会;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个解读标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的解读热绘出(sp606不仅限于在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，表明直方绘出(c)和汇总绘出(d)。Wilcoxon分组下标秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有诱导仅限于，p< 0.05(浅蓝色)诱导SP 606和反之亦然的HD不仅限于在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR解读，从基准依赖改型，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，表明直方绘出(e)和汇总绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组下标秩检验

绘出4 来自很慢成果的CD4+ treg细胞会控制效其所CD4+T细胞会的意志力减少。SP一组用浅蓝色的中央线和白点透露，HD一组用黑色的中央线和白点透露，浅蓝色的中央线/白点透露诱导sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会开展分选。CD4+CD25−(其所答者)被标示为CFSE, Treg按仔细观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠诱导细胞会，指导3天后开展流式细胞会绝技检测。(a-d)与CD4+其所答者比较其所的treg指导(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD其所答者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导一般而言。常用非典改型对照(应答的响其所细胞会不含treg)推算诱导一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 效其所CD4+T细胞会对很慢成果的T细胞会诱导的诱导非常敏感。SP一组用浅蓝色的中央线和白点透露，HD一组用黑色的中央线和白点透露，浅蓝色的中央线/白点透露诱导sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会开展分选。CD4+CD25−(其所答者)被cfsel标示，treg按仔细观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠诱导细胞会，指导3天后开展流式细胞会绝技(CD25反染)和细胞会因长子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606其所答者联合指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导百分率(b)。(c,d) CD25诱导百分率(c)和CD134诱导百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中都的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论据：我们得出的论据是，来自很慢成果长子的诱导失忆CD4+Treg在GITR解读中都得到了扩展和多样化，强调了促使研究工作Treg在1改型癌症风险个基底中都的差异性的有效性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28